Megacariopoyesis humana in vitro: determinación de la concentración óptima de trombopoyetina / In vitro human megacaryocytopoiesis: determination of thrombopoietin optimal concentration / Megacariópoiesis humana in vitro: determinação da concentração ótima da trombopoietina

El estudio de la megacariopoyesis humana se ha visto obstaculizado por la relativa escasez de megacariocitos en la médula ósea (0,05-0,2 % de las células medulares), lo que ha llevado a la optimización de protocolos de expansión in vitro a partir de precursores de diversos orígenes (cordón umbilical, médula ósea y sangre periférica con o sin movilización previa). Los cultivos celulares a partir de precursores han permitido la producción y el estudio tanto de megacariocitos así como de proplaquetas y plaquetas Sin embargo, la producción in vitro óptima de megacariocitos que culminen todos los estadios de diferenciación es un reto aún no resuelto. En este trabajo reportamos los hallazgos concernientes a la determinación de las condiciones y concentraciones de trombopoyetina para lograr una óptima relación entre la cantidad de trombopoyetina empleada y el porcentaje y grado de diferenciación megacariocítica en muestras obtenidas de cinco donantes alogénicos aceptados para trasplante de médula ósea.

The study of human megakaryocytopoiesis has been hampered by the relative scarcity of megakaryocytes in bone marrow (0.05-0.2 % of medullary cells), which has led to the optimization of protocols of in vitro expansion of precursors from diverse sources (umbilical cord, bone marrow and peripheral blood with or without previous mobilization). Cell cultures from different precursors have allowed the production and study of megakaryocytes as well as proplatelets and platelets. However, the in vitro production of megakaryocytes that culminate all stages of differentiation is a challenge that has not yet been resolved. In this work we report the findings related to the determination of thrombopoietin treatment conditions and concentrations to achieve an optimal relationship between the amount of thrombopoietin and the percentage and degree of megakaryocytic differentiation in five allogeneic donors that were accepted for bone marrow transplantation.

O estudo da megacariopoiese humana tem sido dificultado pela relativa escassez de megacariócitos na medula óssea (0,05-0,2 % das células medulares), o que levou à otimização dos protocolos de expansão in vitro a partir de precursores de diversas origens (cordão umbilical, medula óssea e sangue periférico com ou sem mobilização prévia). Culturas de células a partir de precursores permitiram a produção e o estudo tanto de megacariócitos e de proplaquetas e plaquetas. No entanto, a produção ótima in vitro de megacariócitos que culminam em todas as fases de diferenciação é um desafio ainda não resolvido. Neste trabalho, relatamos as descobertas relativas à determinação das condições e concentrações de trombopoietina para obter uma relação ótima entre a quantidade de trombopoietina usada e a taxa e o grau de diferenciação megacariocítica em amostras obtidas de cinco doadores alogênicos aceitos para transplante de medula óssea.

Poly(trimethylene carbonate-co-L-lactide) electrospun scaffolds for use as vascular grafts

Currently, there is great clinical need for suitable synthetic grafts that can be used in vascular diseases. Synthetic grafts have been successfully used in medium and large arteries, however, their use in small diameter vessels is limited and presents a high failure rate. In this context, the aim of this study was to develop tissue engineering scaffolds, using poly(trimethylene carbonate-co-L-lactide) (PTMCLLA), for application as small diameter vascular grafts. For this, copolymers with varying trimethylene carbonate/lactide ratios - 20/80, 30/70, and 40/60 - were submitted to electrospinning and the resulting scaffolds were evaluated in terms of their physicochemical and biological properties. The scaffolds produced with PTMCLLA 20/80, 30/70, and 40/60 showed smooth fibers with an average diameter of 771±273, 606±242, and 697±232 nm, respectively. When the degradation ratio was evaluated, the three scaffold groups had a similar molecular weight (Mw) on the final day of analysis. PTMCLLA 30/70 and 40/60 scaffolds exhibited greater flexibility than the PTMCLLA 20/80. However, the PTMCLLA 40/60 scaffolds showed a large wrinkling and their biological properties were not evaluated. The PTMCLLA 30/70 scaffolds supported the adhesion and growth of mesenchymal stem cells (MSCs), endothelial progenitor cells, and smooth muscle cells (SMCs). In addition, they provided a spreading of MSCs and SMCs. Given the results, the electrospun scaffolds produced with PTMCLLA 30/70 copolymer can be considered promising candidates for future applications in vascular tissue engineering.

Replacement of fetal calf serum by human serum as supplementation for human fibroblast culture / Substituição de soro bovino fetal por soro humano como suplemento para cultura de fibroblastos humanos

INTRODUCTION: Fetal calf serum (FCS) is commonly used as a supplement in the culture medium for fibroblast cells. This supplementation is far from ideal as sample quality varies from batch to batch and the composition of FCS is not completely known. In addition, FCS may be contaminated with viruses and/or prions and may also cause adverse immunologic responses in humans. Due to these facts, a worldwide effort is being made to find alternatives for xenobiotic elements in cell cultures. Human serum could be a safer alternative, especially for clinical application. METHODS: We investigated human serum as a substitute for FCS in human fibroblast culture. Fresh human serum was obtained from 10 healthy volunteers. Fibroblasts were cultivated in multiwell plates containing either Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) plus 10 percent FCS (D10) or DMEM plus 10 percent human serum (D10H). Cell counts were obtained between 24 and 264 hours of cultivation; results were expressed as the mean number of cells ± standard error of the mean to create cell proliferation curves. RESULTS: There was no statistical difference in fibroblast proliferation between the two groups. Human serum supported human fibroblast growth and proliferation, suggesting that it may be a potential substitute for FCS in human cell culture. Cells cultivated with human serum presented a different morphology, appearing smaller and more rounded as compared to cells cultivated in D10. CONCLUSIONS: These results demonstrate that human serum can be substituted for FCS in human fibroblasts culture and that fibroblasts cultivated in the presence of human serum have a morphology that is similar to in vivo fibroblasts.

INTRODUÇÃO: Soro bovino fetal (SBF) é comumente usado como suplemento no meio de cultura para cultivar fibroblastos. Essa forma de suplementação, porém, não é ideal, pois a qualidade das amostras de SBF é variada e sua composição não é completamente conhecida. Além disso, o SBF pode apresentar contaminação por vírus e príons ou causar complicações imunológicas. Assim, a comunidade científica tem buscado alternativas ao uso de elementos xenobióticos em cultura celular. O soro humano pode ser uma dessas alternativas, principalmente para aplicação clínica. MÉTODO: Soro humano, obtido de sangue de 10 voluntários saudáveis submetidos a avaliação sorológica prévia, foi testado como substituto do SBF em cultura de fibroblastos humanos. As células foram cultivadas em placas multipoços, contendo Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) mais 10 por cento de SBF (D10) ou DMEM mais 10 por cento de sroro humano (D10H). Entre 24 e 264 horas de exposição aos meios testados, as células foram contadas e os resultados foram expressos em média ± erro padrão da média, para obtenção de curvas de proliferação celular. RESULTADOS: Não houve diferença estatística entre os grupos de proliferação. Fibroblastos na presença de soro humano aparentavam ser menores e mais arredondados em comparação àqueles mantidos em D10. CONCLUSÕES: Os resultados permitem inferir que o soro humano pode substituir o SBF em cultura de fibroblastos e que fibroblastos cultivados em meio suplementado por soro humano apresentam morfologia mais semelhante àqueles in vivo.

Cytotoxicity of gamma-ray in rat immature hippocampal neurons

This in vitro study evaluated the detrimental effect of acute gamma (gamma)-irradiation on rat immature hippocampal neurons. Rat immature hippocampal neurons (0.5 day in vitro) were irradiated with 0~4 Gy gamma-rays. Cytotoxicity was analyzed using a lactate dehydrogenase release assay at 24 h after gamma-irradiation. Radiation-induced cytotoxicity in immature hippocampal neurons increased in a dose-dependent manner. Pre-treatments of pro-apoptotic caspase inhibitors and anti-oxidative substances significantly blocked gamma-irradiation-induced cytotoxicity in immature hippocampal neurons. The results suggest that the caspase-dependent cytotoxicity of gamma-rays in immature hippocampal cultured neurons may be caused by oxidative stress.

Análisis morfométrico del proceso de diferenciación in vitro de neuronas del hipocampo / Morphometric analysis of the differentiation process of hippocampal neurons in vitro

Los cultivos neuronales del sistema nervioso central se han venido usando ampliamente para el estudio de los mecanismos que conducen el proceso de diferenciación neuronal, así como también se han empleado como modelos in vitro para evaluar drogas y desarrollar nuevas terapias, de allí la importancia profundizar en la caracterización de dicho proceso. En este estudio, se prepararon cultivos primarios de células del hipocampo para estudiar los tipos celulares desarrollados, el desarrollo de dendritas y axones, la densidad de vesículas sinápticas y el desarrollo de los conos de crecimiento. Mediante inmunofluorescencia usando anticuerpos y marcadores no inmunológicos, se observaron los cambios experimentados por las estructuras de interés durante diferentes estadios temporales (1-21 días). Observamos una mayor proporción de neuronas sobre glias, desarrollo normal de las redes neuronales (conformadas por dendritas y axones), incremento en la longitud de dendritas y el establecimiento de sinapsis. Las vesículas sinápticas también experimentaron un incremento en su densidad a medida que aumentaba el tiempo de cultivo. Finalmente, se estudiaron los cambios morfológicos de los conos de crecimiento observándose que al inicio del cultivo en su mayoría se encontraban cerrados, pero a medida que maduraban las neuronas la proporción de conos de crecimiento abiertos aumentó. Este trabajo representa un avance en la caracterización morfométrica de los cultivos neuronales puesto que recoge de manera simultánea y cuantitativa los principales aspectos que marcan el proceso de diferenciación neuronal. En este estudio, la medición de estas características morfológicas hizo posible establecer parámetros cuantitativos que ayudarán a distinguir las principales etapas de la diferenciación neuronal.

Neuronal cultures of the central nervous system are widely used to study the molecular mechanisms that rule the differentiation process. These cultures have also been used to evaluate drugs and to develop new therapies. From this we can infer the relevance of performing an extended characterization that involves the main aspects driving such process. To carry out such characterization in the present study we prepared primary cultures from hippocampal cells to study cell identity, development of neuronal processes (dendrites and axons), density of synaptic vesicles and development of growth cones. Using immunofluorescence techniques, specific antibodies and non-immunological probes, we studied the changes experienced by the structures under study during different temporal stages (1-21 days). We observed a major proportion of neurons over glia, normal development of neuronal networks (formed by dendrites and axons), increase in the length of dendrites and axons and establishment of synaptic connections. Synaptic vesicles also showed an increase in their densities as long as the time of the culture progressed. Finally, we studied the morphological changes of the growth cones and observed that those were mostly closed at the beginning of the culture period. As neurons matured we observed an increase in the proportion of open growth cones. This work represents an advance in the morphometric characterization of neuronal cultures, since it gathers the main aspects that outline the neuronal differentiation process. In this study, measurement of these morphological features made possible to establish quantitative markers that will allow establishing more precisely the different stages of neuronal differentiation.

Morphological and morphometric study of cultured fibroblast from treated and untreated abnormal scar

To investigate the morphology of cultured fibroblasts derived from abnormal scars and compare it to those of human normal skin. This study was carried out in the Surgical Clinic, Faculty of Medicine, King Abdul-Aziz University, Jeddah, Kingdom of Saudi Arabia between December 2008 and March 2010. Fifty-two samples of hypertrophic and keloid scar were collected. An in vitro study was conducted in which fibroblasts from normal foreskin; abnormal scars were cultured, studied morphologically and morphometrically. There was a highly significant increase in the length and breadth of fibroblasts from the hypertrophic and keloid scars, and highly significant decrease in the bipolarity index compared to control. There was a significant increase in the mean cell area, mean nuclear area and nuclear/cytoplasmic ratio of fibroblast of hypertrophic and keloid scars compared to control. There was a significant decrease in the mean cell area and mean nuclear area of the fibroblast of the treated keloid scar [with all used modalities] compared to untreated ones. Morphologically, abnormal scar fibroblasts has abundant spreading cytoplasm with numerous processes and large nuclei. The cytoplasm, of some cells, contained clumped granules in the peri-nuclear region, numerous vacuoles, and dense vesicles. Morphological and morphometric study showed that hyperactive cultured fibroblasts was a characteristic feature of abnormal scars and the studied modalities of treatment reduced, but not completely nullify this activity

Preliminary results on embryo rescue for circumventing hybridization barriers in Asparagus

Garden asparagus, Asparagus officinalis, is reproductively isolated from a related ornamental species with potential breeding value, Asparagus densiflorus cv. Sprengeri, by pre- and post-zygotic barriers. The latter barrier operates at the endosperm level five days after pollination in A. officinalis x A. densiflorus crosses. To try to circumvent this barrier, in vitro embryo rescue using ovule and ovary cultures was tested. Controlled interspecific crosses were made and 2,032 ovules and 826 ovaries were cultured three days after pollination under various culture media and incubation conditions. Ovaries cultured for 60 days became red (similar to mature fruits), but seed formation was incomplete. Transfer of ovules to other media was necessary to promote embryo development. The interspecific embryos increased their length from 35 microns at the initiation of culture to 1,900 microns after 120 days of culture, but seedlings were not obtained. Histological studies revealed differentiation of protoderm only. The possible causes of the failure of the embryos to complete differentiation and morphogenesis are discussed.

Peroxidases from cell suspension cultures of Brassica napus

Cell suspension cultures of Brassica napus were obtained under different hormonal conditions, using 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) and kinetin as growth regulators. They were analyzed as a culture system for peroxidase production in vitro to avoid many of the problems that affect the production from field-grown roots. Total peroxidase specific activities reached a maximum at the end of exponential growth phase of the cultures. Cultures obtained with 4 mg/l of 2,4-D an without kinetin or with 1 mg/l of 2,4-D and the same amount of kinetin produced twice the total activity of root extracts and, in addition, they released peroxidases to the culture medium, which would be advantageous for the commercial production of the enzyme. Peroxidase patterns, obtained by isoelectric focusing of cell extracts and of culture medium of cell suspension cultures, differed from those of root crude extracts from field-grown plants with additional bands of higher isoelectric points. These cultures showed interesting properties and could be considered an alternative source of peroxidases for commercial production and/or to be applied as a model for physiological research.

Obtençäo e caracterizaçäo de linhagem de células osteoblásticas / Development and characterization of osteoblast-like cell line

Apresentamos metodologia para obtençäo de linhagem de células osteoblástica propagada a partir de tecido ósseo normal. Por meio de técnica de dispersäo enzimática células isoladas do osso parietal de ratos recém-nascidos foram cultivadas em meio de Eagle modificado por Dullbecco supplementado com soro fetal bovino (10 por cento). Após a primeira passagem as culturas foram induzidas pela suplementaçäo do meio com ß-glicerofosfato de sódio (10mM), ácido ascórbico (50ug/ml) e dexametasona (10 elevado a -8 M) para obtençäo de diferenciçäo fenotípica e funcional. A morfologia, presença de atividade de fosfatase alcalina, produçäo de nódulos calcificados, expressäo imunocitoquímica de proteínas do tecido ósseo colagênicas (colágeno tipo I) e näo colagênicas (osteonectina e sialoproteína óssea-II) comprovaram a natureza osteoblástica da linhagem obtida. O sistema desenvolvido confirmou que a técnica de cultivo celular primário a partir de tecido ósseo normal é viável e origina células com as características básicas dos osteoblastos. Essa metodologia de obtençäo de células osteoblásticas pode ser utilizada amplamente em Odontologia, em especial, nos estudos da fisio-patologia óssea e em testes de compatibilidade de biomateriais que estaräo em contato constante com o tecido ósseo

Estudo in vitro da biocompatibilidade da hidroxiapatita utilizada em Implantodontia / An in vitro study on the biocompatibility of hydroxyapatite used as an implant material

A hidroxiapatita é uma substância que apresenta propriedades de natureza física e que säo determinantes dos níveis da sua biocompatibilidade. Säo poucos os trabalhos que analisaram essa biocompatibilidade in vitro. Portanto, propusemo-nos a estudar in vitro o crescimento e a viabilidade de fibroblastos (NIH 3T3) crescidos sobre substrato contendo hidroxiapatita. Os fibroblastos foram cultivados nas mesmas quantidades sobre placas de Petri cobertas com colágeno (n=18, controles) e placas cobertas com colágeno e hidroxiapatita (n=18, tratadas). Três culturas de cada grupo foram contadas diariamente após o plaqueamento durante seis dias. Durante a contagem, foi obtida a porcentagem de viabilidade celular. A morfologia das células foi observada em microscopia de luz e eletrônica de varredura. As células cresceram em íntimo contato com os cristais de hidroxiapatita. Até o terceiro dia após o plaqueamento, o crescimento das duas culturas foi semelhante. A partir do quarto dia, houve um atraso de 24 horas nas culturas tratadas em relaçäo às controles. A viabilidade celular das culturas tratadas (64,38 ñ 2,24 por cento) foi significantemente menor (p<0,01) que a das culturas controles (94,80 ñ 0,10 por cento) durante todo o experimento. Entre tanto, no sexto dia de cultivo, näo havia mais diferença estatística entre o número de células tratadas e controles. Nossos achados comprovam, in vitro, que a hidroxiapatita é uma substância biocompatível. O atraso no crescimento celular e a menor viabilidade provavelmente foram conseqüências da presença física dos cristais de hidroxiapatita, que competiram pelo espaço cultivável das placas

Role of endogenous polyamines in the proliferation of normal hematopoietic progenitor cells: high-proliferative potential colony-forming cells (HPP-CFC), and low-proliferative potential colony-forming cells (LPP-CFC). Studies "in vitro"

This study concerns the role of endogenous polyamines in the proliferation of normal hematopoietic progenitor cells: high-proliferative potential colony-forming cells (HPP-CFC), and low-proliferative potential colony-forming cells (LPP-CFC) in CFW/ep mouse bone marrow cells in the agar culture system. DL-a-difluoromethylornithine (DFMO) was used as a selective and irreversible inhibitor of ornithine decarboxylase which is the first limiting step in polyamine biosynthesis. The polyamines have been implicated in cell proliferation and differentiation. The results showed that DFMO significantly inhibited the formation of LPP-CFC colonies and completely inhibited the growth of the HPP-CFC colonies. Addition of exogenous putrescine at the concentration of 10(-7) M reverses the suppressive action of DFMO in both progenitor cells. At this concentration putrescine alone had no affect on the number or the size of the colonies. It was then concluded that endogenous polyamines appear to be essential for HPP-CFC proliferation and an important requirement for LPP-CFC proliferation.

Diferenciación celular del epitelio mamario en cultivo / Cellular differentiation of the mammary epitelium in culture

The functional differentiation of mammary epithelial cells requires specific hormones, growth factors and chemical signals of the cellular environment. These signals consist in cell communication with the extracellular matirx and cell-cell interactions whic though an intrincated mechanism lead to the events that trigger milk secretion. The mammary epithelial cells HC!! from the cellular line COMMA-1D were cultured in the presence of lactogenic hormones such as insuline, dexametazone and prolactin and further stimulated with the epidermal growth factor. In these conditions the cell differentiated, presenting quantitative changes in shape and volume on their organelle cell structure. These cells synthesize betha casein and the intermediary filaments of keratin demonstrated by immunoblotting as well as electronic micrographies

Citotoxicidad inducida por el tabaco / Cytotoxic and proliferative effect of tobacco

El condensado de humo (CH) a una concentración de 0.40 mg/ml y el uretano a dosis de 5.0 mg/ml disminuyeron la adherencia y la proliferación celulares a porcentajes menores del 30 y 15 por ciento respectivamente, en comparación con las células controles que tuvieron 100 por ciento de adherencia y proliferación. El extracto de tabaco (ET) a una concentración de 16 mg/ml provocó 65 por ciento de inhibición de la proliferación; sin embargo, con 0.79 mg/ml, o dosis menores, los resultados fueron similares a los cultivos celulares testigos y con 0.1 mg/ml se incrementó la proliferación hasta 65 por ciento por arriba de las células testigo. El CH (0.5 mg/ml) dió valores semejantes en la adherencia y proliferación celulares con respecto a los controles. Las células MDCK tratadas con etilen-metanosulfonato y que después fueron expandidas en condiciones habituales, se incubaron con diferentes concentraciones del CH, ET y el uretano, observándose un comportamiento similar al de las celulas MDCK controles. Los cultivos celulares que se incubaron tres días posteriores a su enfrentamiento con el CH (0.05 mg/ml), o con el uretano (2 mg/ml), tuvieron el 50 por ciento de inhibición de la proliferación al compararlos con los cultivos controles. Los datos obtenidos en este trabajo indican que las dosis altas de los productos del tabaco son citotóxicas, reflejándose este hecho en la disminución de la adherencia y proliferación de las células y que las dosis bajas de los PDCT estimulan estos fenómenos celulare

Inoculación experimental del paramixovirus de ojo azul en ratas de laboratorio (cepa Wistar), vía intramuscular / Experimental inoculation of blue eye paramyxovirus in laboratory rats (Wistar) intramuscularly

Se utilizaron un total de 22 ratas (cepa Wistar) de las cuales 2 animales fueron testigo y 20 ratas fueron inoculadas con 1 ml del paramixovirus del ojo azul (POA) con un título de 10 5.55 DICC/ml, por vía intramuscular. El día 0 se tomaron muestras sangúineas por vía intracardiaca de 2 animales testigos, los cuales se sacrificaron posteriormente. Los días 1, 3, 5, 7, 10, 15, 20, 25, 30, 35 posinoculación (PI) se tomaron muestras de sangre para la detección serológica de anticuerpos contra POA, utilizando la técnica de inhibición de la hemaglutinación (IHA), seroneutralización (SN), para realizar biometrías hemáticas (BH) y la obtención de la capa flogística para aislamiento viral. Además se obtuvieron muestras de órganos (encéfalo, pulmón y tonsila) para intentar el aislamiento en tres líneas celulares (MDBK, PK-15, BT) e inmunofluorescencia en cultivo celular (IFCC); de estas mismas muestras se hicieron estudios histopatológicos (HP). Se recolectaron heces y orina durante los 35 días, para el aislamiento e IFCC. En los resultados de las pruebas serológicas se detectaron anticuerpos a partir del décimo día PI, con títulos de 1:4 hasta 1:256 para SN y de 1:8 hasta 1:64 para IHA. En el aislamiento viral de órganos, capas flogísticas, heces y orina se pudo aislar el virus durante todo el periodo de experimentación en las tres líneas celulares, coincidiendo estos resultados con las IFCC; las BH mostraron variación en los valores de neutrófilos, linfocitos y monocitos. No hubo presencia de lesiones significativas tanto macro como microscópicas

Ensayo de la proliferación celular en cultivo de linfocitos de cerdo / Assay kinetics cell proliferations lymphocytes from pigs

Se reporta el cultivo de linfocitos de sangre periférica completa de cerdos sanos e infectados, para evaluar la cinética de proliferación celular; 0.5 ml de sangre fue cultivada en 6.0 ml de RPMI-11640 suplementado, en presencia de fitohemaglutinina y 5-BrdU, a 37§C. Al cabo de 48 horas de incubación se cosecharon y fueron teñidos de acuerdo a la técnica de fluorescencia más Giemsa, obteniéndose así células en diferentes etapas de diferenciación, identificándolas en primera, segunda y tercera división. La actividad proliferativa se midió bajo dos parámetros: índice mitótico e índice de replicación. Los resultados son reproducibles y se pueden diferenciar los efectos citotóxicos de los citostáticos sobre los linfocitos del huésped

Actividad fagocítica de monocitos de sangre venosa de pacientes con tuberculosis pulmonar / Phagocytic activity of venous blood monocytes from patients with pulmonary tuberculosis

El papel que desempeña el macrófago en los individuos infectados con Mycobacterium tuberculosis es fundamental al inicio y durante el curso de la infección. En este trabajo, presentamos la actividad fagocítica in vitro de monocitos de sangre venosa aislados de pacientes tuberculosos. El parámetro estudiado fue la capacidad de los macrófagos para fogocitar eritrocitos de carnero en ensayos in vitro el cual se expresa como índice fagocítico(IF). Los resultados muestran que el IF se encuentra disminuido en los macrófagos de pacientes con tuberculosis PPD- y, en forma más evidente, en los pacientes PPD+ con respecto al IF mostrado por los macrófagos de individuos sanos. Estos resultados sugieren que la disfunción de la fagocitosis en los macrófagos de pacientes con tuberculosis contribuye a la cronicidad de la infección

Inducción de anafases anormales por polvos inorgánicos en cultivo de celulas BALBC/3T3 / Induction of abnormal anaphases by inorganic dusts in culture of BALBC/3T3 cells

Los polvos inorgánicos como el asbesto son capaces de inducir alteraciones cromosómicas in vitro. Estas alteraciones se han comprobado empleando fibras de longitud mayores de 5 µm. En el presente estudio se valoraron las anafases anormales inducidas por fibras de asbesto crisótilo y por hierro carbonilo con un tamaño menor de 5.0 µm. Se sembraron 10 células BALBC/3T3 en medio RPMI-1640 y se expusieron a las siguientes dosis de cada polvo: 0, 5, 10, 20, 40, 80 µg/ml durante 12 horas. Las células se fijaron y tiñeron con safranina-O para valorar las anafases anormales inducidas. Se observó que el asbesto crisótilo fue capaz de disminuir las anafases totales conforme de dosis de éste se elevó (de 36 por ciento a 8 por ciento), y el número máximo de anafases anormales fue de 5.6 por ciento con 40 µg/ml. A esta dosis, las anormalidades más comunes fueron los puentes anafásicos (4.3 por ciento) y las anafases multipolares (1.6 por ciento). El hierro carbolino no indujo disminución de las anafases y las anormales inducidas no fueron estadísticamente diferentes de las observadas en cultivos control. De nuestros resultados podemos concluir que las fibras de asbesto crisótilo menores de 5 µm de longitud inducen daño cromosómico directo e indirecto en cultivo celular

Establecimiento y caracterización de la línea celular CaLo y del CLON Kalo, obtenidos a partir de un carcinoma de cervix, y efecto de IL-2, IL-3, GM-CSF, M-CSF, TNF-Ó E IFN-ç sobre su proliferación / Establishing and characterization of the CaLo cell line and KaLo clon, ontained from a cervix carcinoma and IL-2, IL-3, GM-CSF, M-CSF, TNF-Ó and IFN-ç on it's proliferation

En este trabajo se describe la caracterización morfológica, cromosómica y presencia de desmosomas de una línea celular (CaLo) derivada de una biopsia de cáncer cervicouterino. Nuestros resultados indican que CaLo posee una morfología típica de células epiteliales, una aneuploidia cromosómica con número modal de 58 y presencia de desmosomas de bida a la positividad en membrana para la presencia de desmogleína-1. A partir de CaLo también se aisló un clon llamado KaLo. esta clonación nos proporciona una evidencia del origen maligno de estas células. Ambos tipos celulares fueron cultivados en presencia de algunas citocinas recientemente empleadas en ciertos protocolos clínicos (TNF-Ó, IL-2. IL-3 GM-CSF, M-CSF e IFN-ç). Nuestros resultados demuestran un efecto inhibidor de la proliferación por parte de TNF-Ó, IL-3 y GM-CSF, mientras que con M-CSF e IFN-ç no se detectó efecto. Por otra parte, obresvamos un incremento en la proliferación celular en presencia de la IL-2. Estos resultados dan indicios de que el TNF-Ó, la IL-3 y el M-CSF pueden tener posibilidades de aplicación clínica por sus propiedades inhibidoras; mientras que ponen en evidencia el riesgo de utilizar in vivo la IL-2, pues activa la proliferación de células tumorales de cérvix, tal como se ha informado para algunos carcinomas de cabeza y cuello

Mutagenic bioassay of certain pharmacological drugs: II. Mebendazole (MBZ)

El Mebendazole (MBZ), o 5-benzoyl- 1H-benzimidazole-2- il ácido metil éster carbámico fue estudiado con tres ensayos de corto plazo. Se probó su capacidad para inducir micronúcleos "in vivo" en eritrocitos policromáticos de médula ósea de ratones CFW. Se analizaron 3 dosis, 25, 50 y 100 mg/kg de peso corporal inyectados intraperitonealmente. Las 3 dieron incremento significativo (p < 0.01). Las pruebas "in vitro" se realizaron en células CHO. Se analizó la capacidad para inducir aberraciones cromosómicas y figuras anormales por prueba de anafase-telofase. Se detectó una frecuencia aumentada en la formación de dicéntricos, gaps, C-mitosis, puentes y cromosomas rezagados. La acción genotóxica observada puede asociarse con la estructura química de un æester carbámico derivado que sugeriría un papel de mutágeno directo